通过微生物糖苷水解酶激活植物受体样蛋白

   日期:2025-06-23     来源:本站    作者:admin    浏览:66    
核心提示:  A,用半定量RT-PCR测定的指示的RXEG1 N. Benthamiana转化子中的转基因表达水平。从四周大的转基因植物的叶子中分离总RNA,并

  A,用半定量RT-PCR测定的指示的RXEG1 N. Benthamiana转化子中的转基因表达水平。从四周大的转基因植物的叶子中分离总RNA,并用于cDNA合成。通过使用Benthamiana EF-1α作为内源对照的半定量RT-PCR确定转基因的表达水平。在表达RXEG1SynΔCT或衍生突变体的构造的示意图中显示了从转基因扩增的片段(RXEG1ΔCT-EGFP)。B,指示的RXEG1 N. benthamiana转化体中的蛋白质表达。将蛋白质从六周古老的转化体的叶片中分离出来,由RXEG1天然启动子驱动,用GFP-trap a珠子进行免疫沉淀,并使用抗GFP进行蛋白质印迹。通过抗ugpase量化了负载量。重复两次实验,结果相似。C,接种寄生虫后,RXEG1 N. Benthamiana转化子的疾病症状。接种寄生虫动物孢子后2天,每种指示的畸形症状被拍摄。D,RXEG1SynΔCT的过表达抑制了RXEG1 N. Benthamiana中的phytophthora parasitica感染。RXEG1 N. Benthamiana转化子表达RXEG1SynΔCT,两个指示的突变体或EGFP在35S启动子的控制下被寄生虫寄生虫寄生虫接种。使用QPCR使用基因组DNA定量寄生虫的定殖。接种后2天收集接种叶片,并用于DNA分离。使用基因组DNA通过qPCR定量寄生虫的定殖,并将其标准化为EGFP对照,该对照将其设置为1。数据表示为平均值±SEM(n = 3生物学独立重复)。通过单向方差分析分析数据,然后进行Dunnett的测试。e,f, RXEG1 N. Benthamiana转化体中的细菌定植。用假单胞菌PV浸润所指示的转化体的叶子。番茄DC3000 HOPQ1-1突变体(DC3000ΔHOPQ1)(OD = 0.0002)。接种后2和3天确定细菌滴度。CFU,形成殖民地的单元。数据显示为框图,并绘制了单个数据点(n = 8个生物学独立的样本),中心线,盒子边缘和晶须分别表示中位数,下四分位数以及最小值和最大数据点。通过双向方差分析分析数据,然后进行土耳其测试。重复三次实验,结果相似。G,Bak1与野生型和Sobir1/Sobir类似的淘汰N. Benthamiana的C端EGFP标记的RXEG1共表达。用纯化的XEG1(1 µM)蛋白处理10分钟后,将浸润的叶子在40小时后40小时收集。用GFP-TRAP A珠子免疫沉淀蛋白,并使用抗GFP或抗BAK1进行蛋白质印迹。重复三次实验,结果相似。未编写的凝胶在补充图2中显示。

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