寡核苷酸购自集成的DNA技术。在融合的克隆试剂，CloneAmp HIFI PCR预兆，Lenti-X浓度试剂盒和恒星具有化学胜任的细胞被购买了Takara Bio。微型套件和自旋柱购自Qiagen。Fugene HD转染试剂购自Promega。DMEM，Glutamax，Alexa Fluor 647鬼笔环肽（A22287）和Alexa Fluor 555鬼笔环肽（A34055）购自Thermo Fisher Scientific。胎牛血清（FBS）购自加州大学旧金山分校（UCSF）细胞培养设施。L929小鼠成纤维细胞（ATCC，CCL-1）购自美国型培养物收藏。MDCK细胞是UCSF的Mostov实验室的礼物。原发性皮肤成纤维细胞（CC-2511），小鼠胚胎成纤维细胞（M-FB-481）和人骨髓衍生的间充质干细胞（PT-2501）购自Lonza Bioscience。Nexcelom 3d 384孔超低附件经过处理的圆底多孔板购自Nexcelom Bioscience。Cellstar细胞固定表面384孔平底板购自Greiner Bio-One。从康宁购买了384孔光学成像平坦的透明底部处理的板。H9人多能干细胞（HPSC）（WA09）购自Wicell。EDTA（46-034-CI）和生长因素减少的Matrigel（356231）购自Corning（Corning）。GELTREX，HESC合格（A1413302），Essential 8 Flex中型套件（A2858501），Essential 6 Flex Medium Kit（A1516401）和先进的DMEM/F12（12634028）购自Thermo Fisher Scientific。重组人/小鼠/大鼠活化素A蛋白（338-AC-050）购自R＆D系统。IPS细胞的FBS（1701）购自Sciencell。Cellmask深红色质膜染料购自Invitrogen。苯霉素 - iFluor 405试剂（AB176752）购自ABCAM。

　　根据制造商的协议，购买并在PBS中购买并稀释以下抗体：Dykddddk表位标签Alexa Fluor 647偶联的抗体（1042E，Rabbit，R＆D Systems，IC8529R，AEOB0118081，1：100）;Dykddddk表位标签Alexa Fluor 488偶联的抗体（1042E，Rabbit，R＆D Systems，IC8529G，AEOA0521031，1：100）;抗Myc-TAG（9B11）小鼠单克隆抗体（Alexafluor 647结合物）（细胞信号技术，2233，25，1：100）;抗HA-TAG（6E2）小鼠单克隆抗体（Alexafluor 647结合物）（细胞信号技术，3444，15，1：100）;抗人HGFR/C-MET（95106）Alexafluor 488偶联抗体（R＆D Systems，Fab3582G，1：50）;抗EGFR抗体（DH8.3）（Alexafluor 647）（Novusbio，505999af647，1：50）;和抗6×他的标签（His.h8）抗体（ABCAM，AB18184，1：100）。

　　使用FACSARIA II细胞分选仪或LSR II流式细胞仪（Beckton-Dickinson）进行细胞分选和流式细胞仪。使用Opera Phinix自动旋转盘共聚焦显微镜进行共聚焦显微镜检查，并在384孔板中具有×20的水下物镜；尼康与CSU-X1旋转盘共聚焦单元具有×60和×100油浸泡目标；或带有带有×40水浸水物镜的Airyscan 2的Zeiss LSM 980。

　　将所有构建体都克隆到包含SFFV启动子，Kozak共有序列和流感型血凝素（MkTiialSyifClvFFA）50的PHR载体中。

　　为了设计同步构建体，从Uniprot51中的拓扑注释中鉴定出来自细胞粘附分子的跨膜和细胞内区域。编码每个CAM ICD和TM区域的密码子优化基因是从集成的DNA技术购买的，并使用融合内克隆插入矢量。每个CAM TM和ICD区域使用融合内克隆融合到细胞外结合结构域（例如GFP，抗GFP）（补充表2）。所有纳米机构或SCFV ECD的序列都是从先前报道的工作或公开可用的专利获得的序列20,52,53,54,55,56。对于涉及肠上皮细胞的实验，将内部核糖体入口位点（IRES）和嘌呤霉素-N-乙酰转移酶基因（PURO）在PHR载体内的GFP – ICAM-1和GFP-TERNE构建体的下游克隆。通过RF Biotech验证质粒。

　　慢病毒是通过使用Fougene 6 HD转染试剂（根据制造商的规程）在HEK293T细胞中使用Fougene 6 HD转染试剂（根据制造商的规程），在HEK293T细胞中使用Fougene 6 HD转染试剂（根据制造商的规程），在6孔处于大约70％舒适率的HEK293T细胞中使用Figene 6 HD转染试剂（根据制造商的协议），将包装蛋白（PMD2.G和P8.91）与感兴趣的PHR质粒一起产生。转染两天后，收集病毒上清液，通过0.45 mm的过滤器并立即用于转导。

　　为了转导原代细胞，使用Lenti-X浓缩器试剂盒（Takara）根据制造商的方案将慢病毒浓缩20倍。

　　在含有10％FBS的DMEM中培养L929和MDCK细胞。为了产生稳定的细胞系，将病毒上清液（50–400 µL）用1.5 mL培养基稀释，并在12孔菜肴中直接用细胞（1×105 L929或MDCK）镀板。然后，感染后24小时，将病毒培养基替换为正常生长培养基，并将细胞膨胀到T25烧瓶中。使用荧光标记的抗体对适当的表位标签进行染色，并通过荧光激活的细胞分选（FACS）进行表达。除非另有说明，否则每个实验都使用大量种群。为了生成具有调谐表达水平的GFP – ICAM-1和GFP-TERNEL L929细胞系，将添加到细胞的总病毒滴定在50至400 µL之间，并使用FACS对不同的Syncam表达水平进行对细胞进行排序。对于APH4和IF1联合剂，通过将单个细胞排序为96孔板来建立单细胞种群。

　　为了确认每种细胞系中综合的表达水平，使用FACS分析了细胞。将细胞用Tryple分离，并转移到圆底96孔板上。通过离心（在400G时持续4分钟）将细胞固定，去除上清液，然后将细胞重悬于40μlPBS中，其中含有荧光染色的偶联抗体。将细胞在4°C染色50分钟。然后将细胞用PBS洗涤两次，并重悬于5％FBS的PBS中。然后使用流式细胞仪（BD LSR II，BD FACSDIVA）分析细胞。然后使用FlowJo（Treestar）分析流式细胞仪数据。

　　在进行实验之前，所有细胞系都使用Tryple分离，重悬于1 mL DMEM中，计数，然后稀释至每毫升4×105个细胞。L929细胞稳定地表达胞质BFP和GFP Syncam，将1：1与L929细胞与表达胞质MCHERRY表达胞质MCHERRY的L929细胞和384-WELL平底板中的抗GFP Syncam，带有细胞固定物表面（3.2×104细胞，80 µL总体积，37°C）。在t = 3 h时，使用荧光共聚焦显微镜（phenix）以×20放大倍率成像板。从制造商的软件（Harmony）导出了最大预测图像。鉴定了不同大小的不同细胞对，并在ImageJ中测量了接触角。通过测量位于细胞–细胞界面的GFP信号作为整个细胞中存在的一部分，在ImageJ中确定了GFP富集百分比。在Prism 9（GraphPad）中进行了测得的接触角和富集值的数据分析。

　　我们表征了在GFP涂层表面上扩散Syncam细胞的速率，界面大小和形态。将纯化的GFP蛋白稀释至PBS的最终浓度0.5 µm，并施加足够的体积（〜100 µL）以覆盖8孔玻璃底成像室的底部表面。将该溶液在冰上孵育10分钟。除去多余的溶液，并用PBS冲洗腔室。接下来，用10 mg ML-1牛血清白蛋白（BSA）和1 mg ML-1β酪蛋白（Sigma-Aldrich）的溶液阻止腔室，至少在冰上至少1小时。除去阻塞溶液，并用PBS洗涤腔室3次。使用细胞度（C8-1.5H-N）腔室时，使用抗6×-His抗体（AB18184）和6×-His标记的GFP（AB134853）获得具有GFP的表面的全面覆盖。在4°C下在腔室表面上孵育100抗PBS中的抗体。用PBS洗涤3次后，将含有His标记GFP的10 µg mL-1溶液在4°C的表面上孵育1小时。接下来，用10 mg ML-1 BSA的溶液和1 mg ml-1β酪蛋白（Sigma-Aldrich）阻塞腔室，在冰上至少1小时。除去阻塞溶液，并用PBS洗涤三次。

　　为了制备细胞进行扩散测定，使用胰蛋白酶EDTA将L929细胞分离并重悬于细胞培养基中。将大约50 µL从汇合T25烧瓶中重悬的细胞溶液加入200 µL的细胞培养基中，并放入成像室中。然后将腔室转移到配备有Oko Labs环境控制阶段的旋转盘共聚焦显微镜中。在2小时内，每3分钟用×60的石油浸泡物镜对细胞进行成像。在最初的60-90分钟内，通过监测在综合细胞的细胞质中表达的细胞质荧光蛋白来观察到不同细胞在表面上的扩散。

　　通过对获得细胞掩模的强度进行二进制来分析图像，然后可以使用该图像计算足迹的总扩散面积（a）和周边（p）。为了表征界面的形态，计算了循环度（C = P2/4πA）并在不同的Syncams之间进行比较。这些测量还使用抗FLAG TAG荧光抗体（标签SynCAM构建体）进行，以直接在与盖玻片界面处测量面积和形态。为了比较不同的扩散动力学，随着时间的推移，面积的变化拟合了以下形式：a = bt1/4，其中b是扩展速率系数。以前使用该模型比较在粘合表面上扩散细胞的动力学26。分析是在MATLAB（2020a）中实施的。

　　为了可视化肌动蛋白细胞骨架，固定扩散细胞并根据标准程序对免疫组织化学进行染色。将细胞固定在4％PFA中的细胞骨架缓冲液（10 mM管道，100 mM NaCl，300 mM蔗糖，1 mM EGTA，1 mM MGCL2）中固定20分钟。然后将细胞洗涤3次，并在PBS中用0.1％Triton X-100溶液在冰上透化10分钟，然后再次洗涤3次。然后，在PBS（PBS-BSA）中用10％BSA在4°C下用10％BSA封闭细胞。为了可视化肌动蛋白的细胞骨架，用荧光标记的鬼笔环肽染色（与Alexa 647、555或405荧光染料共轭）。然后使用×100放大倍率的旋转盘共聚焦显微镜对细胞进行成像。通过用细胞膜深红色质膜染色（Invitrogen）染色来确定细胞周围。为了测量研究细胞骨架抑制剂对细胞扩散的影响，将细胞引入含有抑制剂的培养基中，并允许在GFP涂层表面（CK666（100 µM），latrunculin b（5 µm），SMIFH2（100 µm）（100 µm），blebbistatin（50 µm）（50 µmmmmmmmmmmmmmmmmm）中，允许分布在GFP涂层表面（CK666（100 µM））上。然后将细胞固定并根据上述过程进行染色，然后使用Zeiss 980 Airyscan显微镜和40×40的水免疫物镜（Zen Blue）进行成像。

　　在进行实验之前，所有细胞系都使用Tryple分离，重悬于1 mL DMEM中，计数，然后稀释至每毫升1×103个细胞。L929细胞稳定地表达胞质BFP和不同亲和力的抗GFP syncam，将1：1：1与表达胞质MCHERRY的L929细胞和不同亲和力的抗GFP syncam混合在一起，并在384-well ula flost中表达gfp-iciCAM-1的L929细胞，表达gfp-iciCAM-1。在t = 24小时时，使用荧光共聚焦显微镜（phenix）以×20放大倍数成像。

　　为了量化多细胞差分排序测定法中不同表达单细胞的组织，我们从多通道3D共聚焦堆栈中计算了径向分布函数g（r）。以×20放大倍率成像表达MCHERRY和BFP的细胞，Z-Step大小为10 µm。对于每个颜色通道，将图像堆栈中的每个切片均进行阈值和二进制，并找到集群的质量（COM）。通过计算每个像素从COM的距离并归一化到群集内像素的密度来找到G（R）。为了创建一个捕获簇中细胞分布的单个值，我们计算了G（r）分布的COM，并从BFP单元的值中减去了MCHERRY单元的该值。因此，大值表明麦克利细胞更靠近簇的中心，小值表明BFP细胞更靠近簇的中心。图像分析是在MATLAB（2020a）中实施的。

　　L929细胞稳定地表达了与正交异质对和胞质麦克利或BFP的Syncams。在进行实验之前，使用Tryple拆下细胞系，重悬于1 ml DMEM中，计数，然后稀释至每毫升4×105个细胞。每对在384孔平底板中混合1：1，并带有细胞固定表面（3.2×104个细胞，80 µL总体积，37°C）。在t = 3 h时，使用荧光共聚焦显微镜（phenix）以×20放大倍率成像板。使用制造商的软件生成了最大预测图像。

　　为了验证异粒子syncam对的正交性，该子集的特征是从父母L929细胞中分类的能力。使用Tryple拆下Syncam细胞系，重悬于1 mL DMEM中，计数，然后稀释至每毫升1×103个细胞。根据制造商的说明，使用Tryple将亲本的L929细胞分离，用细胞染色染色，并将其稀释至每毫升1×103个细胞。在ULA圆底井中将两个Syncam和WT L929细胞混合1：1：1（80 µL），并使用荧光共聚焦显微镜（PHENIX）在24 h×20放大倍率后成像。然后使用制造商的软件（Harmony）生成最大预测图像。在软件中，分割了单个单元格，并根据所有细胞的平均位置计算组装中心。然后确定WT（远红）L929细胞和Syncam（BFP）细胞与组件的先前计算中心的距离。然后计算WT和Syncam细胞平均距离之间的差异并表示为热图，其距离更大，对应于增加WT细胞从组装中排除的距离。

　　同型联合剂的设计旨在损害结合区域的ECD顺式互动。反平行的亮氨酸拉链应融合到纤维接头结构域，该拉链应有利于反式的结合，该纤维接头结构域延伸了近距离区域37,38,36的受体。在没有FibCon接头的情况下设计同型同步器的努力失败了。这些工程的ECD与ICAM-1 TM/ICD融合在一起。

　　产生了稳定表达同粒同体受体和胞质麦克利的L929细胞。克隆细胞系是通过单细胞分选获得的。使用Tryple分离细胞系，重悬于1 ml DMEM中，计数，然后稀释至每毫升1×103个细胞。将细胞在384孔ULA圆底板中孵育（80个细胞，80 µL总体积，37°C）24小时，然后通过荧光共聚焦显微镜（Phenix）成像。使用制造商的软件（Harmony）生成了最大预测图像。

　　以前产生了表达WT PCAD和胞质麦克利的L929细胞6。表达胞质BFP的L929细胞，有或不稳定地表达抗PCAD Syncam（ICAM-1 TM/ICD），将1：1与L929细胞混合在一起，在384-WELL ULA ULA圆头板（80 µL总体积，37°C）中，在384-WELL ULA ULA圆盆板中稳定表达WT PCAD和胞质MCHERRY，并将其混合。（Phenix）。使用制造商的软件（Harmony）生成了最大预测图像。在Harmony软件中，计算每个时间点上从不同井中的每个时间点计算每个最大投影图像的L929单元格和WT或抗PCAD细胞（BFP）的总面积。然后对BFP面积与MCHERRY细胞的面积的比率进行计算，并在24小时内绘制，其比率增加了，对应于从多细胞组装中排除BFP细胞（扩展数据图10B）。此外，在t = 24小时内，将细胞分割，并将组件中心的位置计算为MCHERRY+和BFP+细胞的平均位置。然后计算BFP+和MCHERRY+细胞与组件中心的相对距离（扩展数据图10C），其距离更大，对应于增加BFP+ L929细胞的排除。

　　对于多细胞模式实验，使用Tryple分离L929细胞系，重悬于1 mL DMEM中，计数，然后稀释至每毫升1×103个细胞。根据制造商的协议，在稀释之前，分别将APH4和IF1的Syncam用CellTrace远红色和CFSE染色。

　　为了生成两细胞交替模式，将表达GFP-ICAM-1（细胞1）的L929细胞与表达胞质MCHERRY和LAG16-ICAM-1（抗GFP）（抗GFP）的L929细胞（细胞2）（1：1：1：1 80 µL）。为了产生三细胞桥接模式，将表达GFP-ECAD（细胞1）的L929细胞与表达胞质MCHERRY，LAG16-ECAD和抗CD19-ICAM-1（细胞2）的细胞混合在一起，以及表达细胞质BFP和CD19 – ICAM-1：CD19-ICAM-1（Cell 3）（3）（1：1：1：1：1 80 µL）的细胞。为了生成三细胞环状模式，将表达GFP-ECAD和抗MBP – ICAM-1（细胞1）的L929细胞与表达LAG16- ECAD和MCHERRY – ICAM-1（细胞2）的细胞以及表达MBP – ICAM-1，LAM4-1- ICAM-1- ICAM-1和细胞质BFP（Cell）BFP（3）（1：1：1：1：1：1：1：1：1：1：1：1：1：1：1：在所有情况下，将细胞铺在ULA圆底井中，并在2小时后使用共聚焦显微镜（Phenix）成像。使用制造商的软件（Harmony）生成了来自不同井的最大预测图像。为了计算相互作用概率表，对于每个最大预测图像，将单元格分段。从分段细胞的位置鉴定出细胞 - 细胞接触，并计算每种相互作用的概率并表示为热图。

　　为了形成分离的三细胞和四细胞环状组件，表达GFP-ECAD和抗MBP – ICAM-1的L929细胞（单元1）；lag16- eCAD和MCHERRY-ICAM-1（细胞2）;将MBP – ICAM-1，LAM4 – ICAM-1和胞质BFP（细胞3）稀释至每毫升4×103个细胞，并在平底孔中充分使用细胞固定表面。鉴定了单个对，并产生并导出最大投票图像。

　　在ULA圆底井中（1：1或1：1：1：1：80 µl总数），将表达WT ECAD和胞质BFP，APH4 – ICAM-1或IF1 – ICAM-1的L929细胞彼此混合（单独或三个）。使用共聚焦显微镜在48小时后成像细胞。使用制造商的软件（Harmony）从不同的井生成最大投票图像，并根据组装表型进行分类。

　　成年人类皮肤成纤维细胞（NHDF-AD）和小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）在含有10％FBS的DMEM中培养。间充质干细胞（MSC）在间充质干细胞生长培养基（LONZA）中培养。

　　为了产生表达综合构建体的稳定细胞，将病毒上清液（15 µL×20浓缩病毒）用1.5 mL培养基稀释，并直接用生长到80％汇合的细胞（5×104 MSC，MEFS，MEFS或NHDFs plate plays plate）。然后，转导后24小时，将病毒培养基替换为正常生长培养基，并将细胞膨胀到6孔盘中。进一步对MEF进行了分类，以通过FACS表达Syncam构建体。

　　在F.F.的UCSF人配子，胚胎和干细胞研究委员会（GESCR）的官方批准下，我们使用了WICELL从Wicell购买的WA09人类胚胎干细胞系。这些细胞系及其原始样本已完全取消识别，没有作者可以访问标识符。

　　HPSC（WA09，WICELL）保持在凝胶状涂层的六孔板上的E8培养基中。在初始化平滑肌分化之前的两天，将HPSC与EDTA分离，并被重新播放到胶状涂层的六孔板中。一旦HPSC达到汇合，将E8培养基吸入，并用100 ng ml -1激活素A代替1 ml。每孔A Essential 6，用10 ng ml -1 bmp4替换为100 ng ml -1活化素A。两天后，将培养基吸入并用10 ng ml -1bmp4的E6培养基代替2 ml。在第5-9天，每隔一天将细胞与新鲜的E6培养基+2％FBS保持。从第10天开始，用高级DMEM/F12+10％FBS替换培养基三次。

　　为了生成具有稳定表达联合体的SMC，将SMC在96孔板中生长至80％汇合，并用1 µL的20倍浓缩病毒转导。24小时后，除去培养基并用新鲜培养基代替。

　　如前所述57分离并培养肠上皮。简而言之，小肠隐窝与雄性C57BL/6小鼠的十二指肠分离。将组织用15 mM EDTA放入冰冷的PBS中30分钟，然后在多个部分中剧烈涡流以释放隐窝。The supernatant containing the crypts was filtered on a 70 μM mesh, and then the crypts were pelleted and resuspended in growth-factor-reduced Matrigel and cultured as 3D enteroids with ENR medium (Advanced DMEM/F12 (Thermo Fisher Scientific, 12634-028) with 1× N2 (Thermo Fisher Scientific, 17502-048), 1×B27（Thermo Fisher Scientific，17504-044），10毫米HEPES（Thermo Fisher Scientific，15630080），1×Glutamax（Thermo Fisher Scientific，35050-061），1 mm N-乙酰基半胱氨酸（Sigma-Aldrich A9165）（Sigma-Aldrich A9165），100 U MIMLIN和100 MG MIMLIN和100 MLINMLIN和（Corning，30-002），补充了50 ng ml-1 EGF（Sigma Aldrich，E9644.2MG），100 ng ml-1 Noggin（R＆D 6057-ng/cf）和5％R-Spondin-spondin键入的培养基）。每3天更换培养基，并机械解离并每周传递。

　　对于这些实验，在加利福尼亚大学旧金山大学（UCSF）特定的无病原体动物设施中维持小鼠。所有维护和实验均根据机构动物护理委员会和实验室动物资源中心制定的指南进行。所有实验程序均由UCSF实验室动物资源中心批准。小鼠被安置在UCSF Parnassus的UCSF LARC动物护理设施中。它们被安置在单个特定的无病原体套房中。它们在呼吸机笼中每笼中最多可容纳五只小鼠，并在12 h – 12 h的光线周期和受控温度和湿度条件下（20–26°C和30-70％），并随意食物和水。

　　为了表达联合剂构建体，如先前所述的58，用慢病毒转导器官。首先，使用TryPLE将3D肠动物分离为单个细胞，然后将其生长在生长因素还原的基质和转导培养基中（添加了50％Wnt3a构成培养基的NR培养基，10μm烟酰胺，烟酰胺10μmY-27632（Sigma-Aldrich，Y0503-1MG））3-5天，以富集干细胞。然后将肠动物解离，沉淀，重悬于含有8μgml-1的聚甲烯（Sigma-Aldrich，H9268-5G）的转导培养基中，并在32°C下以600g的浓缩病毒在600g中以600g的速率孵育，然后在32°C下孵育37°C，孵育6小时。然后将细胞沉淀并重悬于母质中，并在转导培养基中生长3天，然后切换为ENR培养基。放大后，通过在培养基中加入1μgml -1紫霉素（Thermo Fisher Scientific，A1113803）进行抗生素选择。

　　GFP – ICAM-1，GFP-螺旋，抗GFP – FIBCON – ICAM-1或抗GFP – FIBCON-TERTH在MSC，NHDFS或SMC中转导。对于这些实验，抗GFP – ICAM-1和抗GFP-TERTER构建体的纤维接头结构域都包括在前细胞中的表达。所有表达GFP的细胞均与质粒一起转移以表达胞质BFP，所有抗GFP表达细胞均与表达胞质MCHERRY的构建体共转染。然后，转导后24小时，除去培养基并用新鲜培养基代替。4至7天后，将MSC，SMC或NHDF用Tryple分离，重悬于培养基中并将其镀在384孔板中。然后，电镀后24小时，使用荧光共聚焦显微镜（Phenix）成像井。

　　L929 cells stably expressing WT PCAD, cytosolic mCherry and LaG16–synCAM (ICAM-1, ECAD or tether control) were mixed 1:1 with L929 cells stably expressing WT ECAD, cytosolic BFP and a GFP–synCAM (ICAM-1, ECAD or tether control) in a ULA round-bottom plate (80 total cells, 80 µl, 24 h,37°C）。在混合之前，使用Tryple拆下L929细胞系，重悬于1 mL DMEM中，对，然后将其稀释至每毫升1×103个细胞。使用荧光共聚焦显微镜（Phenix，×20放大倍率）对组件进行成像，并使用制造商的软件生成了来自不同井的最大预测图像并显示。

　　为了修改表达WT NCAD的L929细胞和表达WT PCAD的L929细胞之间的组装，该实验是按照上述表达WT NCAD和胞质GFP代替WT ECAD细胞的L929细胞进行的。

　　在384孔板的孔中形成了表达胞质BFP和GFP – TERNE，GFP – ICAM-1或GFP – ECAD的MDCK细胞的粘附层（16,000个细胞，每孔被镀孔）。48小时后，表达WT PCAD，胞质MCHERRY和LAG16 – ICAM-1，LAG16-螺旋，lag16- eCAD或未添加其他受体的L929细胞（每孔24,000个细胞）。使用荧光共聚焦显微镜（Phenix）对两层之间的相互作用进行成像24小时。在导出制造商软件中的图像后，通过将九个相邻视野缝制在一起，形成了组件的缩放图像。MCHERRY+组件的圆度和表面积均在制造商软件（Harmony）内的每个领域进行量化。

　　如前所述，建立了单层肠培养物。59。使用Tryple将3D肠动物分离为单个细胞，在PBS中洗涤，并使用CellTrace染色。将150,000个表达GFP – ICAM-1或GFP-螺旋的细胞铺在40μLERN培养基中的384孔PATE上，含有5％生长因子降低的Matrigel，并补充了3μmChir和10μmY-27632。4小时后，将另外60μl的ENR培养基添加到每个孔中。然后，添加了电镀后24小时，添加了表达抗GFP-fibCon-the的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）或抗GFP-FIBCON – FIBCON – ICAM-1和胞质MCHERRY（16,000个细胞）。24小时后，使用荧光共聚焦显微镜（Phenix）对井进行成像。从制造商的软件（Harmony）导出了最大预测图像和3D图像。

　　有关研究设计的更多信息可在与本文有关的自然投资组合报告摘要中获得。