菠菜细胞色素B6 F复合物的冷冻EM结构在3.6Å分辨率下

   日期:2025-06-22     来源:本站    作者:admin    浏览:71    
核心提示:  a,抗坏血酸抗菌纯化的纯化的B6 F复合物的吸收光谱。421 nm处的峰对应于结合颜料的Soret带(叶绿素A和Haems)。554和668 nm

  a,抗坏血酸抗菌纯化的纯化的B6 F复合物的吸收光谱。421 nm处的峰对应于结合颜料的Soret带(叶绿素A和Haems)。554和668 nm处的峰分别对应于Cytf和叶绿素a的C型出现。插图显示了抗坏血酸降低的减去铁氰化物氧化的B6 F(虚线)和二硫代石降低的减去抗坏血酸抗坏血酸(虚线)CYTB6 f的氧化还原差异光谱。氧化还原差异光谱显示出在523和554 nm处的血液F吸收峰,以及在534和563 nm处的吸收峰,对应于CytB6的B型haems。使用25 mm cm-1(f)和21 mm cm-1(b6)34的灭绝系数,CYTB6 B型Haem与CyTF的C型Haem的计算比率为〜2。光谱表现出完整的CYTB6 f的吸收特性。在室温下记录光谱。b, SDS–PAGE analysis of purified cytb6 f indicates that the sample is highly pure, with the four large subunits of the complex (cytf, cytb6, the Rieske ISP and subunit IV) running at ~31 kDa, ~24 kDa, ~20 kDa and ~17 kDa, respectively and the four small subunits (PetG, PetL, PetM and PetN) running at around 4 kDa (not shown).纯化的CytB6 F的C,D,负染色和BN-PAGE分析证明了样品是二聚体且高度同质的,单个带对应于泳道1中显示的二聚体Cytb6F。泳道2显示了一种样品,该样品在用1%Triton X-100孵育后故意单域进行了单体,持续1%Triton X-100。有关凝胶源数据,请参见图1。E,由纯化的二聚体Cytb6 F复合物还原塑蛋白的催化速率,这取决于停止流量吸光度光谱。通过从酶 - 催化反应(实线)中取出初始线性区域的初始线性区域确定200 E-S-1的速率,并减去在没有酶(已长扎线)的情况下测得的背景速率。在不存在甲状动服的情况下,未观察到塑素蛋白还原 (短线)。在监测597 nm的吸光度损失的同时,在含有塑料蛋白和B6 F的溶液中添加甲状压素醇后,开始反应。最终浓度为50 µm塑蛋白,185 nm B6 F和250 µm甲状压素醇。所有实验均以一式三份进行,并在没有B6 F或Decylplastoquinol的情况下进行对照。

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